Purificación y reconstitución de una actividad de V ATPasa, presente en las membranas plasmáticas del músculo liso de las vías aéreas

Abstract

Para estudiar los mecanismos que participan en los procesos de relajación-contracción de la musculatura lisa de vías aéreas, aísla, purifica, caracteriza y reconstituye la V-ATPasa presente en las membranas plasmáticas del músculo liso de vías aéreas de bovino. Encuentra que los nucleótido cíclicos AMPc y GMPc son reguladores de la actividad y el 3-fosfoglicerato estimula la VATPasa. El veneno crudo de escorpión (Titytus zulianus) aumenta la actividad de la ATPasa, mientras que el cloruro de tributilestaño (TBT) inhibe la acción. Para la reconstitución de las fracciones, utiliza lípidos crudos aislados de membrana plasmática o mediante fosfolípidos asilados de soya. La V-ATPasa es activada por intermediarios glicolíticos siendo el 3-fosfoglicerato mejor que el gliceraldehído3-fosfato, la activación es bloqueada por bafilomicina A1, inhibidor selectivo de la V-ATPasa. El lactato y piruvato activan la V-ATPasa a través de un canal conductor de cloruros o un ABC transportador. Demuestra así, que existe un control metabólico (glicólisis) de la V-ATPasa, en el músculo liso traqueal. En la purificación de la V-ATPasa utilizando C12E9 y un gradiente de glicerol, obtienen tres picos de actividad que fueron analizados mediante SDS-PAGE, y que muestran cadenas polipeptídicas similares, que al ser reconstituidos exhiben activación por protonoforos y sensibilidad a bafilomicina A-1, característica de una actividad de V-APTasa.