IDENTIFICACIÓN DE LAS CELULAS PROGENITORAS EN SANGRE FETAL Y DE ADULTOS

Abstract

Las células madres y progenitoras de sangre (CPSP) de adultos o de cordón han - adquirido una gran importancia desde finales del milenio como fuente de células para trasplantes autólogos y alogénicos en adultos, niños y en fetos in útero con ciertas deficiencias congénitas. Los objetivos de este estudio fueron identificar las células progenitoras en sangre prenatal in útero y sangre de cordón de recién nacidos a término. mediante estudios hematológicos y de inmunofenotipos (IF). Movilizar con quimioterapia y factores de crecimiento las CPSP de pts con malignidades y recolectarlas mediante aféresis. Identificar las CPSP por estudios de IF. Obtener un No adecuado de ellas para injertarse en trasplantes autólogos. Estandarizar un procedimiento de congelación de dichas células. Identificar las células CD34+ en leucemias... Materiales y métodos: 278 muestras de sangre de fetos 17-32 semanas de gestación, de cordocentesis de neonatos a termino, sangre de adultos pre y postaféresis de CPSP, muestras de productos de aféresis de CPSP de pts con malignidades, de sangre y médula ósea de pts con leucemia. Se realizaron determinaciones de Hb, Hto, electroforesis de Hb a las sangres fetales. Las CPSP fueron movilizadas con ciclofosfamida y G-CSF ó GM-CSF, recolectadas en las máquinas de aféresis Las CPSP y otros tipos de células, fueron identificadas por citometría de flujo mediante un panel de anticuerpos monoclonales (ac mon.): CD34, CD19, CD22, CD24, CD20, CDIO, CD7, CDS; CD2, COI, CD4, CD8, CD3. Se utilizó marcaje doble para subclasificar las células progenitoras con CD34 PE/ CD33-FITC y CD34 PE / HLA-Dr- FITC. Los productos de aféresis fueron congelados con Hespan + albúmina+ DMSO a -80 oC y posteriormente se reinfundieron al paciente. Resultados: la sangre fetal prenatal mostró un ascenso en los valores de Hb y Hto desde la semana 17 a la 32 de gestación. El VCM mostró macrocitosis severa siendo entre las 17-20 semanas de 130 fl El análisis IF con ac. mon. de las células de sangre fetal prenatal desde la edad de 17 semanas de gestación hasta la semana 32, permitió identificar la expresión de marcadores para leucocitos con los ac. CD45 y HLA-Dr, del marcador CD34 que identifica células madres y progenitoras, el cual tuvo tendencia a disminuir a medida que aumentaba la edad gestacional, de los marcadores para los linfocitos T: CD2, CD7, CD4 y CDS, de los marcadores para linfocitos B: CDIO, CD19, CD20, de los marcadores mieloides CD13, CD14 y CD33. Se detectaron en la muestra de sangre de cordón 0,86 ± 0,33% de células CD34, siendo las células CD34+ / CD33- las mas abundantes. La determinación de células CD34+ en muestras de sangre de pacientes postmovilización mostró valores promedios de 2,70 ± 3,1% y hubo marcaje para leucocitos, linfocitos B y T, linfocitos T, 2 monocitos y mielocitos. Se hizo recuento del No de células recolectadas en 30 productos de aféresis, el cual fue de 2,32±1,62 x 105, siendo el volumen promedio de células de 1,25 ± 0,8 x 1010 y el vol. promedio total de células recolectadas por Kg de peso corporal en esos productos de aféresis fue de 1,75 ± 1,25 X 108. El total de células CD34+ / Kg de p. del pte recolectadas en los 30 productos de aféresis fue de 2,25 ± 2,57 X 106. Se detectaron células madres CD34+ en todos los tipos de leucemias estudiadas tanto en las agudas como en las crónicas; siendo el porcentaje de células CD34+ más alto en leucemias agudas sobre todo en las de estirpe linfoide. En conclusión, en este trabajo se identificaron con ac. mon. diferentes tipos de células que incluían madres y progenitoras identificadas con el ac. CD34+ en sangre de fetos de 17-32 semanas, sangre de neonatos a término, sangre pre y postmovilización, productos de aféresis de CPSP. El % cel. CD34+ tuvo tendencia a disminuir desde la semana 17-32, Se detectaron cel. CD34+ en sangre fetal de cordón 0,86±0,33%; en sangre postmovilización 2,70 ±3,1%. Las células CD34+/ Kg de p. recolectadas en este estudio fueron suficientes para injertarse en los receptores. Los hallazgos de células CD34+ en leucemias agudas-y crónicas nos llevan a concluir que una leucemia puede originarse en cualquier estadio de desarrollo de maduración celular.